Наркотики

Градуировка хроматографа проводится по фе­нобарбиталу, барбамилу и этаминалу натрия. Серии контрольных растворов этих веществ готовятся в подвижной фазе в диапазоне концентраций 0,03 — 1,0 мг/мл. По результатам анализа для каж­дого вещества строятся градуировочные графики зависимости вы­соты хроматографического пика (h, мм) от содержания веществ в пробе (G, мг), где G = С • Vg; С — концентрация анализируемого вещества, мг/мл; Vg — объем вводимой дозы, мкл.

Значения градуировочных коэффициентов (К, мм/мг) для фе­нобарбитала, барбамила, этаминала натрия в соответствии с гра- дуировочной характеристикой h = К • G были рассчитаны методом наименьших квадратов.

Предел обнаружения (Gmin, мг) рассчитывается по величине такого количества вещества, которое вызывает сигнал, превышающий в 5 раз уровень флюктуационных шумов, который на шкале чувст­вительности, равной 0,1 е.о.п. (единиц оптической плотности), состав­ляет 2 мм. Отсюда минимальное значение сигнала hmin = 2 мм х 5. Значения пределов обнаружения фенобарбитала, барбамила и эта- минала натрия, рассчитанные по формуле, приведены в табл. 44.

Большинство анализируемых биообъектов, со­держащих токсические вещества, делятся на следующие категории в зависимости от их морфологических особенностей, определяющих соответствующие схемы пробоподготовки.

Каждая из этих групп требует своей аналитической схемы, так как методы изолирования, описанные для мочи (тип 1), не всегда пригодны для крови (тип 2) и тканей (тип 4), и наоборот (схемы 17 — 20). Методы изолирования, которые включают этап удаления белков, обычно необходимый для типа 4, совсем не обязательны для такого биоматериала с небольшим содержанием белка, как моча.

Правильные результаты анализа в целом и экстракции в част­ности во многом зависят от доинструментального этапа, т.е. пред- аналитической техники обработки образца. Для каждого биообъекта необходимо предусмотреть в связи с его спецификой следующее: 1) корректный отбор пробы; 2) хранение пробы; 3) подготовку пробы к экстракции; 4) схему и метод экстракции; 5) наличие эндогенных и экзогенных веществ, влияющих на чистоту экстракта и конечный анализ яда и его метаболитов.

Если первые четыре фактора связаны с техникой экстракционной обработки, учет последнего фактора требует от исследователя зна­ния токсико- и фармакокинетических параметров биологической матрицы и анализируемого образца. На содержание эндогенных и экзогенных компонентов в экстракте влияют: 1) возраст, пол и вес пациента, определяющие во многом распределение яда и его ме­таболизм; 2) параллельное присутствие других экзогенных хими­ческих веществ (лекарственные средства, кофеин, табак, алкоголь и др.), изменяющих фармакокинетические и фармакодинамические параметры яда; 3) диета — свободные жирные кислоты связываются с альбуминами и конкурируют на этапе связывания яда с белком: так, если токсическое вещество введено до приема пищи, то вслед­ствие особенностей всасывания усиливается реабсорбция яда в тон­кой кишке и соответственно повышается его концентрация в крови; 4) генетический эффект — относительно человека подобная инфор­мация очень разноречива, однако необходимо отметить, что от­дельные индивидуумы обладают повышенной толерантностью к действию некоторых химических агентов; если для одних доза введенного яда является смертельной, то для других эта же доза относительно безвредна (по крайней мере не вызывает летального исхода); 5) другие факторы, действие которых необходимо предус­матривать,— болезнь (может дать повышенный фон некоторых эн­догенных соединений), работа с соединениями бытовой или инду­стриальной химии (повышенный фон эндо- и экзогенных веществ). Ниже приводятся некоторые особенности различных биообъектов.

Аналитическая служба, осуществляющая химико-токсикологи­ческий анализ средств, вызывающих одурманивание, является од­ним из инструментов государства в борьбе с наркоманией, поскольку хорошо налаженная и оснащенная аналитическая служба позволяет контролировать все вышеперечисленные уголовно наказуемые де­яния и способствует эффективной диагностике и лечению больных наркоманией.

В 1991 г. Верховным Советом РФ был принят законодательный акт, отменяющий уголовную ответственность за употребление нар­котиков и как следствие запрещающий в общем случае принуди­тельное обследование подозреваемых лиц с целью установления факта употребления наркотических и психотропных средств. Однако это не исключает возможности принудительного изъятия образцов крови, мочи и других биообъектов при необходимости проведения судебно-медицинской экспертизы в случаях, предусмотренных внут­ренним и международным законодательством.

Сложная финансово-экономическая и политическая обстановка в странах бывшего СССР и связанное с этим снижение авторитета и активности правоохранительных органов внушают большие опа­сения, что СНГ в самое ближайшее время может стать сферой активного внимания со стороны международного и отечественного наркобизнеса.

В иммуноферментных методах для детектиро­вания реакции "антиген — антитело" в качестве метки (маркера) используются ферменты. Как правило, они представляют собой различные оксидазы, способные окислять (специальное химическое вещество — хромогенный субстрат) с образованием окрашенных продуктов. По интенсивности окраски и судят о присутствии или отсутствии наркотического средства в анализируемой пробе.

По технике выполнения различают два типа иммуноферментного анализа (ИФА): гомогенный ("Сива", ЭМИТ) и гетерогенный (ИФАВ РАН, "Хоффман-ла Рош").

В гомогенном ИФА все компоненты реакции — антитела (ан­тисыворотки), определяемое вещество, меченое определяемое ве­щество (конъюгат), хромогенный субстрат — находятся в одном агрегатном состоянии — растворе. На первой стадии анализа в реакционной среде присутствуют одновременно три компонента: аликвота анализируемой биопробы, конъюгат (определяемое веще­ство с ферментной меткой) и антитело (антисыворотка). Вследствие обратимости реакции связывания "антитело — антиген" определя­емое вещество биопробы (гаптен) и конъюгат (меченый гаптен) конкурируют между собой за ограниченное число мест связывания антитела.

Меченый антиген, связанный с антителом, не дает окраски вследствие потери активности фермента за счет пространственных затруднений. Меченый антиген получают с помощью специфиче­ских химических приемов, в результате чего определяемое вещество ковалентно связывается с ферментом.

На второй стадии анализа к реакционной смеси добавляется хромогенный субстрат, который под Действием фермента-метки претерпевает химическое изменение, превращаясь в окрашенное соединение. Полученная окраска регистрируется визуально или с помощью спектральных методов.

В гомогенном ИФА в качестве метки используются следующие ферменты: лизоцим, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, малатдегидрогеназа. При связывании меченого гаптена с антителом активность фер­мента-метки в реакции с хромогенным субстратом снижается за счет пространственных изменений белка фермента (блокируется доступ субстрата к ферментативным центрам). Это явление назы­вается торможением. В этом случае окраска анализируемого рас­твора после добавления субстрата будет прямо пропорциональна концентрации не вступившего в связь с антителом меченого гаптена, т.е. прямо пропорциональна концентрации конкурента — наркоти­ка, находящегося в биопробе.

В наиболее распространенных случаях гетерогенного ИФЛ ан­титело иммобилизуется на каком-либо твердом носителе, например полистирольных планшетах, пробирках, бусах.

 

 

Анализ каннабиноидов представляет собой определенные труд­ности вследствие их высокой липорастворимости и низкой концен­трации в анализируемых биожидкостях — моче и крови. Поэтому более часто содержание каннабиноидов устанавливается в смывах рук и ротовой полости курильщиков.

Наиболее простым и чувствительным методом обнаружения кан­набиноидов являются иммунохимические методы, которые детек­тируют не только важнейший метаболит — а9 -ТГК-кислоту, но и другие метаболиты. У хронических наркоманов в моче иммуно- ферментным методом определяется более 20 нг/мл в течение месяца (от 4 до 77 дней), а у "легких" потребителей— в среднем 13 дней (от 3 до 29 дней) после последнего употребления.

Более селективные методы — ГЖХ, ВЭЖХ, ГХ/МС — исполь­зуются в качестве подтверждающих методов. Метод ТСХ обычно используется при анализе смывов с пальцев рук, ладоней, губ, полости рта,, т.е. в местах, где конденсируются продукты курения. Смывы производят с помощью ватного или марлевого тампона, смоченного этиловым спиртом.

Из материала тампона каннабиноиды экстрагируют органиче­ским растворителем — этилацетатом, гексаном, петролейным эфи­ром. Экстракт упаривают до конечного объема 0,1—0,3 мл и используют для предварительного обнаружения с помощью цветных реакций и методом ТСХ. Хроматографирование осуществляется в системе "петролейный эфир (40 — 70°С)—диэтиловый эфир (4:1)" двукратно. Обнаружение производят опрыскиванием хроматограм- мы 0,5%-ным раствором прочного синего Б или ББ в 10%-ном растворе карбоната натрия. Величина Rf каннабинола равна 0,76, тетрагидроканнабинола — 0,84.

Следует иметь в виду, что обнаружение каннабиноидов только в смывах не является подтверждением, что данное лицо курило гашиш.

Производные барбитуровой кислоты являются депрессантами центральной нервной системы и часто используются как седативно-снотворные средства. Длительность действия барби­туратов очень различна: от 15 минут (ультракороткие) до одного и более дней (пролонгированного действия). Из 2500 производных барбитуровой кислоты наиболее часто в Российской Федерации отмечается злоупотребление фенобарбиталом, барбиталом, цикло- барбиталом, этаминалом натрия, барбамилом и некоторыми дру­гими. К собственно наркотическим средствам отнесены два послед­них: барбамил и этаминал натрия. По своим физико-химическим свойствам производные барбитуровой кислоты относятся к вещест­вам кислотного характера. Основные фармакокинетические пара­метры некоторых барбитуратов приведены в табл. 5.

 

 Образовавшиеся ионы с помощью си­стемы фокусирующих линз направляются далее в анализатор масс, или фильтр масс, где происходит их разделение по величине от­ношения массы к заряду (m/z) или, поскольку в основном обра­зуются однозарядные ионы, по величине массы. В МСД это система из четырех параллельных, симметрично расположенных гипербо­лических стержней (квадруполь), во внутреннем пространстве ко­торых вдоль долевой оси движется поток ионов. При этом на квадруполь наложено постоянное электрическое поле, в котором все иолы достигают выхода из анализатора. Наложением перемен­ного высокочастотного напряжения последовательно создаются ус­ловия, благоприятные для прохождения ионов только одной массы. Последовательно фильтруя ионы по величине массы, анализатор осуществляет сканирование всех ионов в заданном интервале масс.

Детектор. Ионы определенной массы, выделенные из общего ионного потока, достигают детектора (фотоумножителя) и регист­рируются. Выходные сигналы подаются на ЭВМ, где соответству­ющим образом обрабатываются.

Для количественного анализа бензодиазепинов и бензофенонов в биопробах можно использовать различные методы, в том числе метод добавки, метод внешнего стандарта, метод внутреннего стан­дарта и т.д.

а)
Метод добавки. В соответствии с методом добавки проводят анализ раствора экстракта биопробы и этого же раствора, но с добавкой в него раствора известной концентрации предполагаемого бензодиазепина или бензофенона (эталонного раствора). Анализы растворов "без добавки" и "с добавкой" должны проводиться в одном масштабе регистрации.

Концентрация определяемого вещества (Ci) в растворе экстракта из биопробы определяется по формуле

б) Метод внешнего стандарта. В соответствии с методом внеш­него стандарта и с учетом линейной зависимости выходного сигнала от массы вещества последовательно, вслед за анализом раствора экстракта биопробы проводят анализ эталонного раствора иденти­фицируемого вещества. Концентрация эталонного раствора (Ск) должна быть близка к концентрации определяемого вещества в растворе экстракта. Анализ эталонного раствора и экстракта био­пробы должен производиться в одном масштабе регистрации.

Метод внутреннего стандарта. В соответствии с методом внутреннего стандарта в биообъект до пробоподготовки добавляется известное количество вещества, принятого за стандарт. В анализе бензодиазепинов в качестве внутренних стандартов рекомендуется использовать любой из анализируемых бензодиазепинов или другие вещества, которые в данных условиях хроматографического разде­ления должны полностью отделяться от других компонентов об­разца, элюировать близко к пику анализируемого соединения, не реагировать с другими компонентами, т.е. удовлетворять требова­ниям, предъявляемым к внутреннему стандарту. Можно использо­вать одновременно два и более внутренних стандарта.

Концентрация определяемого вещества (Ci) рассчитывается по формуле

Термином "опиаты" обозначают природные и синтетические вещества с морфиноподобными анальгезирующими свойствами, влияющими на ЦНС и гладкие мышцы. Морфин, основной алкалоид опия, служит стандартом для оценки других опиатов.

Особое влияние опиатов на ЦНС, вызывающее эйфорию, и развивающаяся толерантность (ослабление действия при повторном применении, требующее все больших доз для достижения эффекта) приводят к возникновению физической и психической зависимости (наркомании) у его потребителей. Эта особенность опиатов объяс­няет ограниченность их медицинского применения и мотивы не­медицинского использования.

Алкалоиды опия в соответствии с их химическим строением можно разделить на четыре группы (табл. 8).

Соотношение свободного и связанного (сумма 6- и 3-глюкуро- нидов) морфина в крови спустя 1 — 3 часа после приема препарата изменяется от 1:20 до 1:28, при этом морфина-3-глюкуронида образуется примерно в 7 раз больше, чем морфина-6-глюкуронида.

С желчью выделяется до 10% введенной дозы. При многократном приеме морфина он накапливается в волосах и ногтях.

Кодеин. Кодеин всасывается достаточно быстро после па­рентерального введения. В случае орального приема максимальная концентрация в крови устанавливается спустя 1 час. Время полувы­ведения кодеина 3 — 4 часа, объем распределения — 3,5 л/кг (по другим данным — 5—10 л/кг), клиренс — 10 — 15 мл/мин/кг, связывание с белками плазмы — 7 — 25%.

Метаболитические превращения кодеина протекают главным об­разом в печени. Основными реакциями являются: конъюгирование с глюкуроновой кислотой, О- и N-деметилирование. Основные про­дукты метаболизма соответственно: 6-0-глюкуронид кодеина, нор­кодеин и морфин и коньюгаты двух последних метаболитов (схема 5). В следовых количествах образуется гидрокодон, норгидрокодон, 6 а — и 6 р -гидрокодол.

 

Термин "наркотическое средство" содержит в себе три критерия: медицинский, социальный и юридический. Они взаимосвязаны и в правовом аспекте обязывают признавать средство наркотическим только при единстве трех критериев, а именно: медицинского, если соответствующее средство оказывает специфическое действие на ЦНС, что и является причиной его немедицинского применения; социального, если его немедицинское применение принимает мас­штабы, приобретающие социальную значимость, и
юридического, если, исходя из двух вышеназванных критериев, МЗ страны при­знало это средство наркотическим и включило его в список нар­котических средств.

В случае отсутствия хотя бы одного из критериев одурманива­ющее средство относится к средствам, вызывающим токсикоманию или лекарственную зависимость.

Отнесение тех или иных психотропных средств к группам ве­ществ, находящихся под контролем, является прерогативой мини­стерства здравоохранения каждой страны и определяется соответ­ствующими перечнями веществ.