ГХ/МС-анализ
Выбор того или иного варианта дериватизации определяется задачей ГХ/МС-анализа. Так, при групповом анализе фенолалкиламинов предпочтительным оказывается третий вариант дериватизации, поскольку он ведет к появлению общего, группового иона m/z:179 или 267 (табл.57).
Одна и та же функциональная полярная группа реагирует в различной степени в зависимости от ее положения в молекуле: гидроксил фенольный, алкильный и аллильный проявляют разную активность по отношению к некоторым агентам дериватизации (МБТФА). Стерические затруднения могут приводить к полной остановке дериватизации, например, в N-этил- или N-бутилзаме- щенных вторичных аминах.
Перед ГХ/МС-анализом необходимо удалить избыток фторсо- держащих ангидридов (ТФАА и др.), которые негативно влияют на хроматографическую систему. Силилирующие агенты обычно вводят в колонку в составе дериватизованной смеси, однако их избыток ухудшает рабочие характеристики МСД, загрязняя металлические поверхности.
От качества проведения всех операций пробоподготовки в значительной мере зависят результаты ГХ/МС-анализа.
Для контроля этой стадии в состав серии анализируемых проб обязательно включают холостые образцы биожидкости, не содержащие лекарственного вещества, которые подвергаются всем операциям аналогично исследуемой пробе. Холостая проба показывает собственный фон биожидкости и контролирует степень очистки от эндогенных компонентов, а также возможные загрязнения из растворителя и прочих реактивов ("реактивная ошибка"), материала пробок, прокладок, посуды и т.п. Эти эндогенные и экзогенные соединения образуют фон и в некоторых случаях дают на хрома- тограмме интенсивные пики, сравнимые с анализируемыми.
Некоторые нежелательные процессы хроматографического и масс-спектрального определения
В целях использования всех возможностей хромато-масс-спек- трального метода для получения стабильных и достоверных результатов высокой точности необходимо избежать нежелательных побочных процессов, которые могут идти при хроматографировании или в масс-спектрометре. Эти процессы приводят к потере вещества или его трансформации, что затрудняет или искажает как идентификацию, так и количественное измерение.
Для лекарственных и токсических веществ наиболее часто встречаются следующие:
— термическое разложение в инжекторе или в колонке: декар- боксилирование кислот; деацетилирование диацетилморфина (героина), в процессе которого катализатором являются металлы (никель); разложение 3-гидроксибензодиазепинового кольца (оксазепам, лора- зепам, темазепам); разложение хлордиазепоксида и его метаболита, причем в двух последних примерах регистрация масс-спектра ведется для воспроизводимо образующихся стабильных продуктов реакции;
— адсорбция полярных соединений в инжекторе и в колонке (морфина, барбитуратов и многих других);
— потери веществ из-за недостаточной летучести или неправильно подобранных условий хроматографического анализа.
