Наркотики

Внутри СНГ отмечается распространение полинаркомании, свя­занной с употреблением "лекарственных коктейлей" для усиления наркотического действия, с синтезом новых наркотических средств, вызывающих "мгновенное" привыкание, и т. д.

Предлагаемое Руководство охватывает основные сферы анализа (выбор объекта, пробоподготовка, выбор аналитического метода) вещественных доказательств, биожидкостей, тканей и органов на содержание средств, вызывающих одурманивание.

В Руководство включены аналитические материалы по анализу не только собственно наркотиков, но и других лекарственных средств, активно используемых наркоманами.

Учитывая все сложности анализа (возможность фальсификации пробы, ее сокрытия, малый объем, отрицание факта употребления, присутствие в биопробе большого количества фоновых эндогенных и экзогенных веществ и т. д.), в Руководстве изложена схема предварительных и подтверждающих методов анализа (тонкослой­ная хроматография, иммунохимические методы, газожидкостная и высокоэффективная хроматография, хромато-масс-спектрометрия).

Каждый практический раздел, предваряется изложением теоре­тических основ каждого метода, что позволяет исследователю более осознанно его использовать.

В приложениях к Руководству собран материал, который необ­ходим исследователю для практического осуществления анализа и интерпретации результатов.

Все предлагаемые методики утверждены бывшим Министерством здравоохранения СССР.Большинство методических рекомендаций являются авторскими разработками сотрудников кафедры токсикологической химии Цен­тральной химико-токсикологической лаборатории ММ А им. И.М. Сеченова (Кислун Ю.В. "ГЖХ-скрининг наркотических и других одурманивающих средств в моче"; Ермаков А.Н., Смирнов А.В. "По­ляризационный флюороиммуноанализ мочи на вещества, вызыва­ющие одурманивание"; Еремин С.К., Бодрина Д.Э. (совместно с ВНИИ хроматографии). "ВЭЖХ-анализ опиатов, производных бар­битуровой кислоты, фенилалкиламинов, производных 1,4-бензоди- азепина").

В написании Руководства принимали участие также следующие сотрудники кафедры и ЦХТЛ:

Н.В. Веселовская, М.В. Белова, Е.В. Уфимцева ("Хромато-масс- спектральное определение наркотических и сильнодействующих ве­ществ в биожидкостях");

Е.А. Симонов ("Определение морфина и кодеина в волосах");

М.В.Белова ("Каннабиноиды").

Остальные разделы Руководства написаны С.К. Ереминым и Б.Н. Изотовым.

Естественно, в первом издании могут быть допущены просчеты, и авторы с большой благодарностью примут все критические за­мечания и пожелания к предлагаемому Руководству, в необходи­мости издания которого у них нет сомнения.

 

Слюна является продуктом секреции желез ротовой поло­сти. Отобранную пробу слюны центрифугируют и для хранения замораживают, чтобы замедлить активность ферментов. Хранить лучше всего в склянках из тефлона или полипропилена, чтобы избежать поглощения следовых количеств анализируемого вещества стенками стеклянной посуды. Установлено, что неионизированные формы токсического вещества, находящиеся в водном растворе плазмы, пассивно диффундируют в слюну, так что существует прямая зависимость между концентрацией анализируемого веще­ства в слюне и его концентрацией в крови.

Волосы представляют собой относительно гомогенный (с точки зрения агрегатного состояния) биологический субстрат. Яв­ляясь легкодоступными для отбора, они представляют значительный интерес в качестве объекта при проведении химико-токсикологи­ческого анализа как на неорганические, так и на органические яды.

В последние годы установлено, что в волосах наркоманов об­наруживаются опиаты, амфетамины, фенциклидин, метаквалон, кокаин, каннабиноиды. Таким образом, возникает возможность обнаружения наркотиков в отдаленные сроки после окончания их приема и в тех случаях, когда анализ биожидкостей дает отрица­тельный результат. Важно, что наркотические вещества не мета- болизируют в волосах.

Для отбора пробы на площади около 1 см срезается прядка волос как можно ближе к основанию. При этом очень важно, чтобы волосы не изменяли своего относительного положения. Пряд­ка фиксируется липкой лентой на бумаге, помечается верх и низ прядки. Принимая во внимание скорость роста волос (примерно 1 см в месяц), образец делится на кусочки различной длины и исследуется. При этом появляется возможность проследить дина­мику поступления наркотического вещества в организм пациента. Анализ волос длиной 6 — 8 см (6 — 8 месяцев) позволяет судить о степени тяжести наркотической зависимости.

Обнаружение морфина и кодеина проводится путем перевода их в трифторацетатные и пентафторпропиатные производные по следующей методике.

К сухому остатку после экстракции добавляется 200 мкл ан­гидрида соответствующей кислоты и нагревается в течение 20 минут при 60° в герметически закрытом сосуде. После охлаждения до комнатной температуры удаляют избыток реагента в токе инертного газа или воздуха. К сухому остатку добавляют 50 — 250 мкл хло­роформа и 1 — 3 мкл пробы вводят в хроматограф.

Идентификация бензодиазепинов и бензофенонов, содержащихся в биопробах, производится следующим образом:

а)  сопоставляются время (объемы) удерживания и коэффици­енты емкости определяемого компонента и образцов сравнения (эталонный раствор) индивидуальных бензодиазепинов и бензофе­нонов;

б)  сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и об­разцы сравнения (на рис. 55 и 56 приведены УФ-спектры нитра- зепама, хлордиазепоксида, АНБ и АХБ в растворе подвижной фазы);

в)  оценивается совпадение значений времени удерживания оп­ределяемого компонента и образца сравнения при добавлении эта­лонного раствора в раствор экстракта из биопробы (концентрация образца сравнения должна быть близка к концентрации определя­емого компонента) (рис. 57);

г)  сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и об­разца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спект­ральное отношение.

На рис. 58, 59 приведены примеры хроматограмм экстрактов из мочи, желудка, кишечника, печени, почек, полученных на хро­матографах "Милихром" и "Милихром-2". В экспертном материале обнаружены диазепам, оксазепам, медазепам, МХБ.

Тестовая модельная смесь гидазепама, оксазе- пама, нитразепама, хлордиазепоксида, феназепама и диазепама готовится в растворе подвижной фазы. Для этого:

а)  берутся навески гидазепама (25 ± 1 мг), оксазепама (28 ± 0,5 мг), нитразепама (55 ± 0,5 мг), хлордиазепоксида (75 ± 1 мг), феназепама (19 ± 0,5 мг) и диазепама (50 ± 1 мг);

б)  навески переносятся в колбу 50 см , объем доводится до метки, смесь встряхивается до полного растворения и фильтруется. Смесь должна сохраняться при + 4°С.

Хроматографирование модельной смеси проводится при следу­ющих условиях: расход элюента—100мкл/мин; объем вводимой дозы — 2 мкл; масштаб регистрации — 0,4 е.о.п.; время измере­ния — 0,4 с; длина волны — 230 нм. Хроматограмма анализа мо­дельной смеси приведена на рис. 53, а основные хроматографические параметры — в табл. 49.

 

Исследование по аминобензофенонам включает в себя три ос­новных этапа: кислотный гидролиз, экстракцию аминобензофенонов и анализ экстрактов. Объекты (остатки лекарственных форм, моча, кровь, гомогенаты органов или экстракты из них) заливают 6н НС1 и нагревают при температуре 140 — 145°С в течение 60 минут (кровь, моча, части лекарственных форм, ткани печени, почек) или 80 — 90 минут (стенки желудка или кишечника). В случае направленного исследования на сибазон, нозепам, нитразепам время гидролиза можно сократить до 30 минут, а температуру уменьшить до 120°С.

Аминобензофеноны из гидролизатов экстрагируют органически­ми растворителями при рН=6 — 8. В случае исследования внут­ренних органов экстракцию проводят после предварительного от­деления гидролизата (фильтрованием, центрифугированием). Экс- трагенты — хлороформ-изоамиловый спирт в соотношении 100:1 (гидролизаты тканей и органов, остатков лекарственных форм) или гептан (гидролизаты крови и мочи).

Хроматография в тонких слоях (силикагель) используется в основном при исследовании внутренних органов трупа, мочи и лекарственных форм. Метод предусматривает не только разделение аминобензофенонов, но а их обнаружение по собственной окраске, флюоресценции в УФ-свете (2-метиламино-5-хлорбензофенон), об­разованию азокрасителя с N- а -нафтилэтилендиамином, /3 -наф­толом и т.п. Предел обнаружения составляет 1 — 5 мкг аминобен­зофенона в пятне.

Аминобензофеноны из зон, не обработанных реагентами, можно элюировать (спиртом или ацетоном) для снятия электронных спек­

тров и газохроматографического исследования. Основные полосы поглощения аминобензофенонов в этаноле можно наблюдать в области 230 — 240 и 390 — 410 нм.

Стандартные растворы морфина и кодеина после получения их производных по указанной методике хроматографируют в указан­ных выше условиях и получают масс-спектры в режиме сканиро­вания 50 — 600 а.е.м. Данные спектры сравнивают со стандартными спектрами библиотек масс-спектров WILEY, NBS и Pfleger. На рис. 65 приведены масс-спектры трифторацетатных (ТФА) и пента- фторпропиатных (ПФП) производных морфина и кодеина.

Заключение о присутствии или отсутствии исследуемого соеди­нения в пробе проводится на основании наличия всех характери­стических ионов в соответствующем временном интервале при совпадении в пределах 5% соотношения их интенсивностей. Эти расчеты проводятся автоматически после завершения каждого ана­лиза с помощью специально разработанной программы, реализо­ванной в макрокомандах обрабатывающей станции. Оценка коли­чественного содержания исследуемых соединений проводится с ис­пользованием внешнего стандарта.

Масс-спектры, хроматограммы трифторуксусных производных морфина и кодеина, а также результаты исследования волос че­ловека, не принимавшего наркотиков, и волос наркомана (мужчина 34 лет, последний прием наркотика — 35 дней до взятия образца) представлены на рис. 66, 67, 68.

 

При проведении исследования на 1,4-бензодиазепины по нативным соединениям объектами являются кровь, плазма, сыворотка, моча (не менее 10;мл), ткани печени, почек (не менее 200г), желудок и тонкий кишечник с содержимым (не менее 200 г). Изъятые объекты по возможности быстро должны быть направлены на исследование в замороженном состоянии. Консервирование эта­нолом не рекомендуется. Анализ биологических объектов на 1,4- бензодиазепины желательно проводить незамедлительно.

Большинство 1,4-бензодиазепинов связывается с белками крови (в основном с альбумином), их терапевтические уровни могут быть определены современными методами ГЖХ и ВЭЖХ. Данные методы с успехом используются и при анализе мочи, иногда в сочетании с хроматографией в тонких слоях. Однако надо учитывать, что если кровь (плазма, сыворотка) является особенно ценным объектом для установления терапевтической, токсической или летальной кон­центрации 1,4-бензодиазепинов, то информация, полученная при хроматографическом исследовании мочи, позволяет более точно установить природу бензодиазепина. Соотношение концентраций "нативное соединение/метаболит" дает возможность установить дли­тельность нахождения его в организме. Данные хроматографических (ТСХ) исследований производных 1,4-бензодиазепина приведены в табл. 22а.

Для ГЖХ обнаружения производных 1,4-бензодиазепина и их метаболитов используется общая система: стеклянная колонка 2 м х 4 мм с 2,5% SE-30 на хромосорбе Q (80— 100 меш). Хлозепид и его метаболиты имеют следующие индексы удерживания: хлозе­пид — 2453, демоксепам — 2529, дезметилдиазепам — 2496, окса­зепам — 2336, диазепам — 2425, нитразепам — 2885, 7-ацетамидо- нитразепам — 3263, 7-аминонитразепам — 2900, 7-амино-З-гидро- ксинитра^епам — 2890.

Используя полученные результаты, аналитик- токсиколог должен не только подтвердить или опровергнуть пред­положение о присутствии одурманивающего средства в анализиру­емом образце, но и различить случаи хронического и разового использования наркотических средств. Последнего можно достичь, если сопоставить концентрации обнаруженного вещества и его ме­таболитов. Как правило, более высокие концентрации метаболитов свидетельствуют о хроническом применении, а значительное пре­вышение концентрации вещества над концентрацией метаболита— об остром отравлении (разовом употреблении).

Для правильной интерпретации результатов анализа важно зна­ние формы и способа введения. Внутривенное введение или инга­ляция в начальный момент дают оолее высокие концентрации вещества в крови, чем внутримышечное, оральное, подкожное.

В случае анализа трупного материала равные концентрации, обнаруженные в печени и крови, свидетельствуют о хроническом использовании высоких доз наркотических веществ. В случае острого отравления концентрация анализируемого вещества в печени зна­чительно превышает концентрацию его в крови. Высокие концен­трации одурманивающих средств в крови на раннем этапе после внутривенного или орального введения будут соответствовать более высоким концентрациям в легких и печени, в то время как в период выведения концентрация в желчи и моче будет выше, чем в крови.

Одурманивающие средства основного характера дают сравни­тельно низкие концентрации в крови, а отношение концентраций в печени и крови часто выше 10. Соединения кислого характера дают умеренно высокие концентрации в крови, и это отношение находится в пределах от 2 до 5. Для веществ нейтрального характера наблюдаются высокие концентрации в крови и почти одинаковое содержание в других тканях.

Для корректной интерпретации полученных данных такого био­объекта, как моча, необходимо также знание дозы, времени, способа и периодичности введения вещества, кинетики распределения. Од­нако надо оговориться, что в случае наркотиков подобная инфор­мация редко доступна и не всегда полна. Тем не менее можно высказать следующие замечания:1.                Чем выше введенная доза, тем больше вероятность их обна­ружения. Высокие дозы обычно дают более высокие концентрации в плазме и моче. Так, например, при использовании 30 мг кодеина он может быть детектирован в моче в течение 1 — 6 часов после употребления, а при дозе в 60 мг — в течение 1 — 10 часов.

2.                Концентрация вещества в плазме зависит от его распределения в организме, метаболизма и выведения. Для каждого вещества его фармакокинетика индивидуальна. Концентрация наркотических ве­ществ в моче варьирует по сравнению с плазмой и зависит от объема и рН мочи.

3.                Каждое вещество сохраняется в организме разное время. Такое вещество, как кокаин, элиминируется из организма относительно быстро. Например, обычная доза кокаина может быть детектирована в течение дня и менее. Ежедневное длительное употребление ко­каина позволяет его обнаруживать в течение двух-трех дней после окончания употребления.

При курении одной сигареты гашиша в день в моче детекти­руются каннабиноиды в течение одного-двух дней после последнего употребления и в течение трех — пяти дней более чувствитель­ными методами. Ежедневное курение позволяет обнаруживать кан­набиноиды в течение трех и более недель после прекращения употребления.

Общим правилом является факт, что хроническое употребление гашиша приводит к аккумуляции веществ и их метаболитов в организме. Чем чаще прием, тем больше вероятность их обнару­жения.

4.                Различные вещества сохраняются в организме по-разному в зависимости от их химического строения и частоты употребления. Вещества, подобные кокаину, быстро выводятся из организма, по­этому отбор пробы мочи должен производиться как можно скорее после приема наркотика. Для веществ, которые медленно выводятся из организма (например, компоненты гашиша), время отбора мочи не имеет решающего значения.

Поскольку концентрация большинства веществ в моче (за ис­ключением этанола) не коррелирует с их концентрацией в крови и степенью наркотического воздействия, время употребления нар­котического вещества по концентрации в моче не может быть установлено.ГЛАВА 7

Все барбитураты быстро всасываются после орального введения (биодоступность 90— 100%). Из организма они выводятся (экскретируются) с мочой в самых разнообразных формах, как в неизмененном виде, так и в виде метаболитов. Барбитураты пролонгированного действия (типа фенобарбитала) экскретируются в значительных количествах в неизмененном- виде, в то время как барбитураты среднего действия (барбамил, этаминал натрия) интенсивно метаболизируют и в виде исходного соединения выделяются в очень небольших количествах.

Барбитал почти целиком (70 — 90%) в неизмененном виде экскретируется с мочой. Элиминирование медленное (период по­лувыведения— 4 дня). Около 2% дозы экскретируется за 8 часов, около 16% — в течение 32 часов. Детектируемые количества об­наруживаются в течение 16 дней.

Среди других метаболитов имеются два дигидродиола и гидро- ксиметилфенилбарбитуровая кислота. При хроническом употребле­нии около 25% дозы экскретируется с мочой в течение 24 часов в неизмененном виде, 17%— в виде 4-гидроксипроизводного, около половины которого — глюкуронид. Экскреция с мочой неизменен­ного вещества увеличивается в щелочной моче или с увеличением объема мочи. После однократной дозы от 80 до 90% экскретируется с мочой в течение 16 дней (30% — N-гликозид).

Этаминал натрия экскретируется с мочой в течение 5 дней (80% дозы) в виде: 3-гидроксипроизводного (37%), свыше 13% — N-гидрокси-; от 7 до 14% — 3-оксо-; от 10 до 15% 3-карбоксип- роизводных; около 1% выделяется в неизмененном виде (схема 2).