Наркотики

Выбор того или иного варианта дериватизации определяется задачей ГХ/МС-анализа. Так, при групповом анализе фенолалкила­минов предпочтительным оказывается третий вариант дериватиза­ции, поскольку он ведет к появлению общего, группового иона m/z:179 или 267 (табл.57).

Одна и та же функциональная полярная группа реагирует в различной степени в зависимости от ее положения в молекуле: гидроксил фенольный, алкильный и аллильный проявляют разную активность по отношению к некоторым агентам дериватизации (МБТФА). Стерические затруднения могут приводить к полной остановке дериватизации, например, в N-этил- или N-бутилзаме- щенных вторичных аминах.

Перед ГХ/МС-анализом необходимо удалить избыток фторсо- держащих ангидридов (ТФАА и др.), которые негативно влияют на хроматографическую систему. Силилирующие агенты обычно вводят в колонку в составе дериватизованной смеси, однако их избыток ухудшает рабочие характеристики МСД, загрязняя метал­лические поверхности.

От качества проведения всех операций пробоподготовки в зна­чительной мере зависят результаты ГХ/МС-анализа.

Для контроля этой стадии в состав серии анализируемых проб обязательно включают холостые образцы биожидкости, не содер­жащие лекарственного вещества, которые подвергаются всем опе­рациям аналогично исследуемой пробе. Холостая проба показывает собственный фон биожидкости и контролирует степень очистки от эндогенных компонентов, а также возможные загрязнения из рас­творителя и прочих реактивов ("реактивная ошибка"), материала пробок, прокладок, посуды и т.п. Эти эндогенные и экзогенные соединения образуют фон и в некоторых случаях дают на хрома- тограмме интенсивные пики, сравнимые с анализируемыми.

 

 Некоторые нежелательные процессы хроматографическо­го и масс-спектрального определения

В целях использования всех возможностей хромато-масс-спек- трального метода для получения стабильных и достоверных ре­зультатов высокой точности необходимо избежать нежелательных побочных процессов, которые могут идти при хроматографировании или в масс-спектрометре. Эти процессы приводят к потере вещества или его трансформации, что затрудняет или искажает как иден­тификацию, так и количественное измерение.

Для лекарственных и токсических веществ наиболее часто встре­чаются следующие:

—                 термическое разложение в инжекторе или в колонке: декар- боксилирование кислот; деацетилирование диацетилморфина (герои­на), в процессе которого катализатором являются металлы (никель); разложение 3-гидроксибензодиазепинового кольца (оксазепам, лора- зепам, темазепам); разложение хлордиазепоксида и его метаболита, причем в двух последних примерах регистрация масс-спектра ведется для воспроизводимо образующихся стабильных продуктов реакции;

—                 адсорбция полярных соединений в инжекторе и в колонке (морфина, барбитуратов и многих других);

—                 потери веществ из-за недостаточной летучести или непра­вильно подобранных условий хроматографического анализа.

Гомогенный ИФА более экспрессный, время проведения анализа занимает от 1 до 30 минут, включая обработку результатов. Предел обнаружения составляет от 10" до 10" г/мл. Гомогенный ИФА используется при скрининге большого количества образцов для предварительного установления факта употребления одурманива­ющих средств. Недостатком гомогенного анализа является доста­точно высокий фон.

Гетерогенные методы характеризуются высокой чувствительно­стью С10" — 10" г/мл), но более длительным временем проведения анализа (от 2 до 4 часов).

Наиболее чувствительным и удобным среди иммунологических методов количественного определения наркотических и других одур­манивающих средств в биожидкостях является поляризационный иммунофлюоресцентный анализ (ПФИА) (см. раздел 8.2). ПФИА— гомогенный конкурентный метод иммуноанализа. Поляризацию флюоресценции комплекса "антитело — антиген", меченного трас- сером-флюоресцеином, замеряют прямо в растворе, используя осо­бые свойства метки. Изменение степени поляризации испускаемого флюоресцентного света зависит от степени связывания трассера с антителом. Поляризацию флюоресценции измеряют с помощью специальной оптической системы детекции. ПФИА имеет ряд пре­имуществ перед ИФА: большую точность (до 200нг/мл), стабиль­ность метки, меньшую подверженность влиянию температуры и рН среды, характерному для фермент-субстратных отношений, а также быстроту и простоту проведения анализа. Фирмой "Эбботт" (США) создана автоматизированная система TDX для мониторинга и анализа лекарственных и наркотических средств.

В нашей стране ВНИИ биологического приборостроения выпу­скаются поляризационные флюоресцентные анализаторы АФП-2, позволяющие использовать данный метод для анализа средств, вызывающих одурманивание.

Совмещение высокой специфичности, точности анализа с экс- прессностью и простотой выполнения позволяет использовать метод иммуноанализа с помощью индикаторных полосок, дающий воз­можность осуществлять экспресс-диагностику не в лабораторных ("полевых") условиях. В основе метода лежит система детектиро­вания по принципу "ферментных каналов". Суть ее заключается в том, что ферменты, катализирующие последующие реакции пре­вращения хромогенного субстрата в окрашенное соединение, по­мещают в особое микроокружение с ограниченной диффузией. Например, если иммобилизовать их на твердом носителе, то ско­рость катализа сопряженных реакций будет выше при нахождении ферментов на поверхности твердой частицы, чем в случае раздель­ного действия ферментов.

Метод использует два фермента — глюкозооксидазу и перокси- дазу. Антитела и глюкозооксидазу ковалентно связывают с поверх­ностью индикаторной полоски — целлюлозой хроматографической бумаги. Второй фермент — пероксидазу — используют для получе­ния конъюгата с определяемым веществом.

Внутри СНГ отмечается распространение полинаркомании, свя­занной с употреблением "лекарственных коктейлей" для усиления наркотического действия, с синтезом новых наркотических средств, вызывающих "мгновенное" привыкание, и т. д.

Предлагаемое Руководство охватывает основные сферы анализа (выбор объекта, пробоподготовка, выбор аналитического метода) вещественных доказательств, биожидкостей, тканей и органов на содержание средств, вызывающих одурманивание.

В Руководство включены аналитические материалы по анализу не только собственно наркотиков, но и других лекарственных средств, активно используемых наркоманами.

Учитывая все сложности анализа (возможность фальсификации пробы, ее сокрытия, малый объем, отрицание факта употребления, присутствие в биопробе большого количества фоновых эндогенных и экзогенных веществ и т. д.), в Руководстве изложена схема предварительных и подтверждающих методов анализа (тонкослой­ная хроматография, иммунохимические методы, газожидкостная и высокоэффективная хроматография, хромато-масс-спектрометрия).

Каждый практический раздел, предваряется изложением теоре­тических основ каждого метода, что позволяет исследователю более осознанно его использовать.

В приложениях к Руководству собран материал, который необ­ходим исследователю для практического осуществления анализа и интерпретации результатов.

Все предлагаемые методики утверждены бывшим Министерством здравоохранения СССР.Большинство методических рекомендаций являются авторскими разработками сотрудников кафедры токсикологической химии Цен­тральной химико-токсикологической лаборатории ММ А им. И.М. Сеченова (Кислун Ю.В. "ГЖХ-скрининг наркотических и других одурманивающих средств в моче"; Ермаков А.Н., Смирнов А.В. "По­ляризационный флюороиммуноанализ мочи на вещества, вызыва­ющие одурманивание"; Еремин С.К., Бодрина Д.Э. (совместно с ВНИИ хроматографии). "ВЭЖХ-анализ опиатов, производных бар­битуровой кислоты, фенилалкиламинов, производных 1,4-бензоди- азепина").

В написании Руководства принимали участие также следующие сотрудники кафедры и ЦХТЛ:

Н.В. Веселовская, М.В. Белова, Е.В. Уфимцева ("Хромато-масс- спектральное определение наркотических и сильнодействующих ве­ществ в биожидкостях");

Е.А. Симонов ("Определение морфина и кодеина в волосах");

М.В.Белова ("Каннабиноиды").

Остальные разделы Руководства написаны С.К. Ереминым и Б.Н. Изотовым.

Естественно, в первом издании могут быть допущены просчеты, и авторы с большой благодарностью примут все критические за­мечания и пожелания к предлагаемому Руководству, в необходи­мости издания которого у них нет сомнения.