Гомогенный ИФА
Гомогенный ИФА более экспрессный, время проведения анализа занимает от 1 до 30 минут, включая обработку результатов. Предел обнаружения составляет от 10" до 10" г/мл. Гомогенный ИФА используется при скрининге большого количества образцов для предварительного установления факта употребления одурманивающих средств. Недостатком гомогенного анализа является достаточно высокий фон.
Гетерогенные методы характеризуются высокой чувствительностью С10" — 10" г/мл), но более длительным временем проведения анализа (от 2 до 4 часов).
Наиболее чувствительным и удобным среди иммунологических методов количественного определения наркотических и других одурманивающих средств в биожидкостях является поляризационный иммунофлюоресцентный анализ (ПФИА) (см. раздел 8.2). ПФИА— гомогенный конкурентный метод иммуноанализа. Поляризацию флюоресценции комплекса "антитело — антиген", меченного трас- сером-флюоресцеином, замеряют прямо в растворе, используя особые свойства метки. Изменение степени поляризации испускаемого флюоресцентного света зависит от степени связывания трассера с антителом. Поляризацию флюоресценции измеряют с помощью специальной оптической системы детекции. ПФИА имеет ряд преимуществ перед ИФА: большую точность (до 200нг/мл), стабильность метки, меньшую подверженность влиянию температуры и рН среды, характерному для фермент-субстратных отношений, а также быстроту и простоту проведения анализа. Фирмой "Эбботт" (США) создана автоматизированная система TDX для мониторинга и анализа лекарственных и наркотических средств.
В нашей стране ВНИИ биологического приборостроения выпускаются поляризационные флюоресцентные анализаторы АФП-2, позволяющие использовать данный метод для анализа средств, вызывающих одурманивание.
Совмещение высокой специфичности, точности анализа с экс- прессностью и простотой выполнения позволяет использовать метод иммуноанализа с помощью индикаторных полосок, дающий возможность осуществлять экспресс-диагностику не в лабораторных ("полевых") условиях. В основе метода лежит система детектирования по принципу "ферментных каналов". Суть ее заключается в том, что ферменты, катализирующие последующие реакции превращения хромогенного субстрата в окрашенное соединение, помещают в особое микроокружение с ограниченной диффузией. Например, если иммобилизовать их на твердом носителе, то скорость катализа сопряженных реакций будет выше при нахождении ферментов на поверхности твердой частицы, чем в случае раздельного действия ферментов.
Метод использует два фермента — глюкозооксидазу и перокси- дазу. Антитела и глюкозооксидазу ковалентно связывают с поверхностью индикаторной полоски — целлюлозой хроматографической бумаги. Второй фермент — пероксидазу — используют для получения конъюгата с определяемым веществом.
