Наркотики

К 10 мл мочи добавляется 1 н раствор гидроксида натрия до значения pHel 1 (по универсальному индикатору) и 5 мл бензола. Проводится экстракция в течение 5 минут. Для разделения фаз необходимо центрифугирование при скорости 3000 об/мин в течение 10 минут. Отобранная органическая фаза фильтруется через без­водный сульфат натрия (1 — 2 г) на бумажном фильтре, смоченном бензолом, и содержимое на фильтре промывается бензолом (1 — 2 мл). К бензольному экстракту добавляется 100 мкл 5%-ного раст­вора НС1 в метаноле. После перемешивания экстракт упаривают в токе воздуха. Сухой остаток растворяют в 50 мкл этанола.

Метод газожидкостной хроматографии широко используется в анализе органических соединений, в том числе наркотических и лекарственных веществ. Его преимущества обще- признаны и определяются широким выбором хроматографических колонок и детекторов. Метод газожидкостной хроматографии может быть использован в скрининге наркотических и других одурмани­вающих средств и применительно к такому сложному объекту, как моча.

При использовании 10 мл мочи можно обнаружить и иденти­фицировать большинство соединений, за потреблением которых установлен контроль. Предел обнаружения анализируемых веществ в объекте представлен в табл. 34.

К первой части пробы добавляется 2 н НС1 до значения рН-1 — 2 по универсальному индикатору и проводится экстракция эфиром дважды порциями по 5 мл. Время экстракции — 5 минут. Для разделения фаз экстракционную смесь необходимо центрифугиро­вать со скоростью 3000 об/мин в течение 5 — 10 минут. Эфирные экстракты объединяются и пропускаются через безводный сульфат натрия (1 — 2 г) на бумажном фильтре, смоченном эфиром. Фильтр промывается 2 — 3 мл эфира. Таким образом получают экстракт I. К водной фазе добавляется 25%-ный раствор аммиака до значения рН«11 — 12 и проводится экстракция смесью хлороформ — н-бу- танол (9:1) дважды, порциями по 5 мл. Время экстракции — 5 минут. Для разделения фаз экстракционную смесь центрифугируют со скоростью 3000 об/мин в течение 5— 10 минут. Органические экстракты объединяются и пропускаются через безводный сульфат натрия на бумажном фильтре, смоченном экстрагентом. Фильтр промывается 2 — 3 мл экстрагента. Таким образом получают экс­тракт II.

Ко второй части пробы добавляют 2 мл концентрированной НС1 и нагревают в герметично закрытом сосуде на глицериновой бане при 110вС в течение 40 минут. После охлаждения гидролизат филь­труют через бумажный фильтр, смоченный дистиллированной во­дой, и промывают фильтр 2 — 3 мл дистиллированной воды.

Реконструирование проводится непосредственно перед вводом аналитической пробы в инжектор хромато-масс-спектрометра.

Получение смешанных производных для веществ с различ­ными функциональными группами: например, в молекуле 11-нор- 9-карбокси-тетрагидроканнабинола метилируют СООН-группу и си- лилируют ОН-группу; в молекуле фенолалкиламинов силилируют фенольный гидроксил и ацилируют аминогруппу.

Наиболее употребляемые агенты силилирования: N,0-6hc (триметилсилил)-ацетамид (БСА), N,0-6hc (триметилсилил)-трифторацетамид (БСТФА), N-метил (К-триметилсилил)-трифторацетамид (МСТФА) и ацилирования:

N-метил-бис (трифторацетамид) (МБТФА), трифторуксусный ангидрид (ТФАА), гептафтормасляный ангидрид (ГФМА), пентафторпропионовый ангидрид (ПФПА). Одна и та же полярная группа может быть преобразована с помощью различных агентов дериватизации. Так, гидроксил опи­атов, экстрагированных из мочи,— морфина, кодеина и налорфина (внутренний стандарт)— может быть переведен в неполярную груп­пу по реакциям перфторэтерификации (с ПФПА или ГФМА), трифторацетилирования (с МБТФА), силилирования (с БСТФА/1 % триметилхлорсилана) или ацетилирования (с уксусным ангидридом в безводном пиридине). Выбор реакции дериватизации имеет важное значение для количественного определения (SIM) и основан на следующих основных критериях:

—                 хорошее разделение дериватов на хроматограмме;

—                 наличие интенсивных пиков в масс-спектре, обеспечивающих хорошую чувствительность;

—                 стабильность деривата во времени;

—                 отсутствие расщепления пиков дериватов на хроматограмме.

Руководствуясь этими критериями, рекомендуется применять для смеси опиатов два реагента: БСТФА с 1 % триметилхлорсилана или уксусный ангидрид в пиридине. ПФПА и ГФМА образуют дериваты, обладающие "плохим" масс-спектром: вторичные и тре­тичные ионы имеют низкую интенсивность. Трифторацетилирова- ние приводит к расщеплению пика налорфина (моно- и ди-ТФА- налорфин) с изменяющимся во времени количественным соотно­шением и, кроме того, образует нестабильный дериват морфина: 3,6-ди-ТФ А-морфин.

Тестовая смесь "А" — метанольный раствор каждого из следу­ющих веществ в концентрации 100мг/л (в скобках указана вели­чина индекса удерживания): барбитал (1497), этаминал натрия (1740), дифенгидрамин (1873), фенобарбитал (1957), метаквалон (2125), кодеин (2376), морфин (2455), налорфин (2577), хинин (2803), галоперидол (2942), стрихнин (3119).

Эта тестовая смесь охватывает широкую область значений R1 наркотиков. После инжектирования 1 мкл всех соединений (150 нг каждого) должно наблюдаться детектирование соединений тестовой смеси (детектор ПИД) и хорошее разделение соединений с доста­точно четкими пиками. Тестовая смесь стабильна в течение 2 ме­сяцев при хранении в холодильнике (4°С). Раствор этих же сое­динений с концентрацией 1 г/л в метаноле стабилен в течение 2 лет (в холодильнике).

Термин "наркотическое средство" содержит в себе три критерия: медицинский, социальный и юридический. Они взаимосвязаны и в правовом аспекте обязывают признавать средство наркотическим только при единстве трех критериев, а именно: медицинского, если соответствующее средство оказывает специфическое действие на ЦНС, что и является причиной его немедицинского применения; социального, если его немедицинское применение принимает мас­штабы, приобретающие социальную значимость, и
юридического, если, исходя из двух вышеназванных критериев, МЗ страны при­знало это средство наркотическим и включило его в список нар­котических средств.

В случае отсутствия хотя бы одного из критериев одурманива­ющее средство относится к средствам, вызывающим токсикоманию или лекарственную зависимость.

Отнесение тех или иных психотропных средств к группам ве­ществ, находящихся под контролем, является прерогативой мини­стерства здравоохранения каждой страны и определяется соответ­ствующими перечнями веществ.

 

Анализ наркотических и других одурманиваю­щих средств имеет некоторые специфические особенности и отли­чается от собственно судебно-химического и клинического анализов острых отравлений.

Его целью является установление факта присутствия наркоти­ческих и других одурманивающих средств независимо от тяжести состояния, т.е. от найденных количеств вещества. Главная задача анализа — идентификация средств, вызывающих одурманивание. В анализе наркотических и других одурманивающих средств суще­ствуют два основных направления: судебно-правовое (установление факта присутствия, употребления) и клиническое (лечение, реа­билитация, диагностика). Методы, которые используются в хими­ко-токсикологическом анализе наркотических средств, самые раз-’ нообразные. При судебно-правовой направленности вещество ана­лизируется как минимум двумя методами, причем один из этих методов используется для предварительного исследования, а дру­гой — для подтверждающего исследования.

В силу специфики анализа на содержание наркотических и других одурманивающих средств (сокрытие факта употребления, фальсификация проб и т.д.) в основу его методологии положен метод скрининга, используемый при "ненаправленном" анализе, т.е. при анализе на неизвестное вещество.

Первый этап скрининга ставит своей целью получение наи­меньшего количества ложноотрицательных результатов. Например, отрицательный результат вообще при анализе биологических жид­костей означает следующее:

а)  обследуемый никогда не употреблял наркотик;

б)  обследуемый употребляет наркотик нерегулярно, но в послед­нее время его не употреблял;

в)  зная, что будет подвергнут анализу, обследуемый прекратил его употребление для того, чтобы был получен отрицательный ответ;

г)  обследуемый разбавил образец во время отбора пробы или выпил большое количество жидкости либо мочегонное средство перед тем, как у него должны брать пробу;

д)  обследуемый подменил пробу принесенной с собой биожид­костью.

Отсюда следует, что получение ложноотрицательных результа­тов связано с:

а)  недостаточной чувствительностью используемого метода;

б)  преднамеренной фальсификацией пробы и т.д. (см. выше);

в)  недостаточной квалификацией эксперта;

г)  систематическими ошибками исследований.

Второй этап скрининга состоит в удалении ложноположительных результатов.

Положительный результат вообще означает, что обследуемый принимает наркотик: а) постоянно; б) нерегулярно; в) по рецепту врача или самостоятельно или что предварительные методы обна­ружения недостаточно надежны.

При проведении исследования на 1,4-бензодиазепины по нативным соединениям объектами являются кровь, плазма, сыворотка, моча (не менее 10;мл), ткани печени, почек (не менее 200г), желудок и тонкий кишечник с содержимым (не менее 200 г). Изъятые объекты по возможности быстро должны быть направлены на исследование в замороженном состоянии. Консервирование эта­нолом не рекомендуется. Анализ биологических объектов на 1,4- бензодиазепины желательно проводить незамедлительно.

Большинство 1,4-бензодиазепинов связывается с белками крови (в основном с альбумином), их терапевтические уровни могут быть определены современными методами ГЖХ и ВЭЖХ. Данные методы с успехом используются и при анализе мочи, иногда в сочетании с хроматографией в тонких слоях. Однако надо учитывать, что если кровь (плазма, сыворотка) является особенно ценным объектом для установления терапевтической, токсической или летальной кон­центрации 1,4-бензодиазепинов, то информация, полученная при хроматографическом исследовании мочи, позволяет более точно установить природу бензодиазепина. Соотношение концентраций "нативное соединение/метаболит" дает возможность установить дли­тельность нахождения его в организме. Данные хроматографических (ТСХ) исследований производных 1,4-бензодиазепина приведены в табл. 22а.

Для ГЖХ обнаружения производных 1,4-бензодиазепина и их метаболитов используется общая система: стеклянная колонка 2 м х 4 мм с 2,5% SE-30 на хромосорбе Q (80— 100 меш). Хлозепид и его метаболиты имеют следующие индексы удерживания: хлозе­пид — 2453, демоксепам — 2529, дезметилдиазепам — 2496, окса­зепам — 2336, диазепам — 2425, нитразепам — 2885, 7-ацетамидо- нитразепам — 3263, 7-аминонитразепам — 2900, 7-амино-З-гидро- ксинитра^епам — 2890.

Аминазин, дипразин, левомепромазин, тиори- дазин являются наиболее часто встречающимися препаратами, на которые анализируются биологические объекты.

Данные соединения в виде оснований плохо растворяются в воде, хорошо — в этаноле, хлороформе, эфире. Высокая липофиль- ность фенотиазинов обусловливает их депонирование в жировых тканях, вследствие чего они обладают большим периодом пол у вы­ведения, т.е. медленно выводятся из организма. Все фенотиазины относятся к веществам основного характера. Так, величина рКа для аминазина — 9,3, дипразина — 9,1, тиоридазина — 9,5, лево- мепромазина — 9,3.

Растворы производных фенотиазина интенсивно поглощают к ультрафиолетовой области спектра. В их спектре отмечаются два максимума — 250 — 255 и 320 нм. Положение максимума опреде­ляется видом и положением заместителей в молекуле фенотиазина.

Метаболиты^ особенно сульфоксиды, имеют более сложный спектр, например, в разбавленной кислоте спектр хлорпромазин- сульфоксида характеризуется четырьмя максимумами — при 239, 274, 300 и 341 нм.

Основные характеристические частоты ИК-спектров, отражаю­щие типы связей и функциональных групп фенотиазинов, сведены в табл. 23.

Производные фенотиазина являются химически очень лабиль­ными соединениями, особенно легко окисляется атом серы, давая различные продукты сульфоокисления. Радикальные реакции окис­ления одинаково легко осуществляются как в растворах этих ве­ществ в условиях окружающей среды, так и в живом организме.

Основные метаболитические реакции — это сульфоокисление’, N-деметилирование, гидроксилирование, окисление, конъюгация с глюкуроновой кислотой.

Главным путем выведения фенотиазинов является моча. Мето­дики определения производных фенотиазина в биологических жид­костях описаны в методических указаниях "Химико-токсикологи­ческий анализ веществ, вызывающих одурманивание" (М.: МЗ СССР. 1989); более подробные сведения об анализе фенотиазинов можно найти в работах Е.М. Соломатина.ГЛАВА 4

Все бензодиазепины в общем хорошо всасыва­ются из пищеварительного тракта, достигая максимального уровня в крови спустя 1 — 3 часа, однако наблюдаются и некоторые различия в их поведении в организме. Бензодиазепины активно связываются с белками крови, проявляют большое сродство к жи­ровым тканям, в которых накапливаются и из них выделяются в кровь. Этим явлением в значительной степени обеспечивается до­статочно длинный период их полувыведения (табл. 22).

Бензодиазепины выделяются прежде всего с мочой (свыше 60% дозы), остальная часть удаляется через пищеварительный тракт.

Производные бензодиазепинов подвергаются биотрансформации в печени, превращаясь в несколько метаболитов, проявляющих в свою очередь большую фармакологическую активность. Процессы биотрансформации — самые разнообразные и включают в себя ре­акции окисления, деметилирования, дезаминирования, гидрокси- лирования, ацетилирования, восстановления и конъюгации с глю­ку роновой кислотой (схемы 12 — 16).

Пик — кривая, которая описывает зависимость величины сиг­нала от концентрации вещества на выходе из колонки. При не­полном разделении выход двух или более компонентов проявляется в виде одного неразрешенного пика. Идеальный пик представляет собой кривую Гауссова распределения (рис.8).

Удерживание вещества в колонке характеризуется временем удерживания tRj или объемом удерживания VRj, где i — индекс, соответствующий i-му компоненту. При постоянных условиях ра­боты и составе фаз хроматографической системы эти величины постоянны для данного вещества. Величина tR{ соответствует вре­мени появления максимума пика.

Важным параметром удерживания в хроматографии является коэффициент емкости к’, определяемый как отношение количе­ства вещества в неподвижной фазе к количеству вещества в по­движной фазе, т.е. коэффициент емкости определяет степень рас­пределения образца при перемещении его через колонку. Связь удерживания вещества, длины колонки и линейной скорости по­движной фазы можно выразить зависимостью

Чем больше разрешение, тем лучше разделение хроматографи- ческих полос. Более длинные колонки дают лучшее разделение.

Разрешение зависит от трех основных хроматографических па­раметров — селективности (а ), числа теоретических тарелок (эф­фективность колонки) (N) и коэффициента емкости (к’) или коэффициента равновесного распределения к:

Селективность а характеризует способность данной хроматог- раАической системы разделять данную пару веществ, представляет собой отношение чистого времени удерживания двух компонентов и является мерой термодинамического различия в их распределении. Селективность связана с различием во взаимодействии двух ком­понентов в подвижной и неподвижной фазах.

 

Удерживание компонента в колонке будет определяться особен­ностями его физико-химического строения. Характер ориентации молекул относительно поверхности сорбента будет зависеть от про­странственной конфигурации (плоскостной или неплоскостной), эк- ранированности или доступности полярных функциональных групп, наличия внутримолекулярных водородных связей и т.д. Все эти и другие физико-химические характеристики будут определять спе­цифический или неспецифический тип взаимодействия вещества в хроматографической системе (табл. 29).

 

Под специфическим взаимодействием понимают взаимодействие за счет электростатического притяжения разноименных зарядов (ионные взаимодействия) и образования водородных связей, а под неспецифическим — взаимодействия за счет сил Ван дер Ваальса, дисперсионного взаимодействия (гидрофобные взаимодействия).