Наркотики

В данную группу наркотических веществ вхо­дят препараты, приготовленные из различных частей конопли, наиболее распространенные: марихуана (смесь листьев, соцветия), гашиш (смолка, гашишное масло). Однако наркоманами исполь­зуются практически все части растения.

В смолке содержится около 30 различных каннабиноидов. Наиболее важные из них — это каннабидиол (КБД), каннабинол (КБ), (-)-транс-л9-тетрагидроканнабинол (д9-ТГК), (—)-транс- д8 -тетрагидроканнабинол (д8 -ТГК) и д9 -тетрагидроканнабиноло­вая кислота (Д9 -ТГК-кислота).

При курении каннабиноиды быстро (за не­сколько минут) всасываются. При этом возрастает содержание фи­зиологически активных компонентов — КБ и а9 -ТГК — вследствие разложения КБД. Уровень а9-ТГК в крови быстро нарастает, достигая максимальных концентраций через 5 — 30 минут, и быстро снижается из-за активных метаболитических процессов и распре­деления веществ в тканях.

При пероральном введении из-за плохой всасываемости в же­лудочно-кишечном тракте концентрация а9 -ТГК в крови нарастает медленно, достигая максимальных значений через 1,5 — 3 часа. Часть вещества, минуя большой круг кровообращения, депонируется и метаболизируется в печени.

Степень абсорбции а9 -ТГК при ку.рении и пероральном введе­нии индивидуальна и составляет соответственно 2 — 56 и 6 — 20%.

А9-ТГК распределяется в большей степени в тканях, богатых липидами (в печени, почках, легких, мозге; долгое время задер­живается печенью, селезенкой и костным мозгом).

При хроническом приеме а9 -ТГК депонируется в жировой тка­ни. Более полярный активный метаболит 11-гидрокси- а9-ТГК показывает меньшую тенденцию к накоплению, а 8, 11-дигидрок- си-а9-ТГК сохраняется долгое время в липидах и в печени.

Метаболизм каннабиноидов осуществляется преимущественно в печени и достаточно интенсивно. Обнаружено около 50 метаболитов веществ — компонентов конопли. Пути метаболизма, подчиняясь общим закономерностям, однако, имеют видовые и индивидуальные особенности и различны в разных тканях.

Основным неактивным метаболитом А9 -ТГК является 11 -нор- карбокси-А9-ТГК и ее конъюгат с глюкуроновой кислотой. Пер­вичный метаболит — продукт окисления по С-11 — 11-гидрокси- Д9 -ТГК — является более активным, чем исходное вещество-. Также активен 8 /3 -гидрокси- А9 ТГК.

Выведение метаболитов происходит с мочой, калом, секретом слюнных и молочных желез.

Для А9-ТГК примерно 80 — 90% дозы выводится за пять дней после приема, причем около 20% экскретирует с мочой и 65% — с калом. Количество выводимого вещества зависит от дозы и путей выведения.

Степень выведения А9 -ТГК зависит от путей введения (табл. 13, измерение) в первые сутки после приема разовой дозы.

 

С мочой каннабиноиды выводятся в виде метаболитов, основным из которых является ТГК-кислота, на 80% связанная с глюкуро- новой и серной кислотами. С фекалиями в большей степени вы­водится а9-ТГК и ТГК-кислота, конъюгированная с желчными и жирными кислотами.

Обнаружение морфина и кодеина проводится путем перевода их в трифторацетатные и пентафторпропиатные производные по следующей методике.

К сухому остатку после экстракции добавляется 200 мкл ан­гидрида соответствующей кислоты и нагревается в течение 20 минут при 60° в герметически закрытом сосуде. После охлаждения до комнатной температуры удаляют избыток реагента в токе инертного газа или воздуха. К сухому остатку добавляют 50 — 250 мкл хло­роформа и 1 — 3 мкл пробы вводят в хроматограф.

Экспресс-тест образцов, подвергаемых контро­лю, может быть проведен различными способами. Наиболее рас­пространенный — это использование стеклянных или фарфоровых пластинок с углублением, куда помещается образец, который затем обрабатывается реагентом (рис. 3).

Эта пластинка должна быть промыта водой и органическим растворителем (ацетоном или метанолом) после каждого анализа.

Другая техника экспресс-теста предусматривает использование открытых тест-пробирок, куда помещается образец и обрабатыва­ется согласно методике.

Кроме того, экспресс-тесты можно проводить на фильтровальной бумаге, на специальных пластинках (стрипах) или в заранее из­меренных и упакованных теСт-ампулах.

Анализ каннабиноидов представляет собой определенные труд­ности вследствие их высокой липорастворимости и низкой концен­трации в анализируемых биожидкостях — моче и крови. Поэтому более часто содержание каннабиноидов устанавливается в смывах рук и ротовой полости курильщиков.

Наиболее простым и чувствительным методом обнаружения кан­набиноидов являются иммунохимические методы, которые детек­тируют не только важнейший метаболит — а9 -ТГК-кислоту, но и другие метаболиты. У хронических наркоманов в моче иммуно- ферментным методом определяется более 20 нг/мл в течение месяца (от 4 до 77 дней), а у "легких" потребителей— в среднем 13 дней (от 3 до 29 дней) после последнего употребления.

Более селективные методы — ГЖХ, ВЭЖХ, ГХ/МС — исполь­зуются в качестве подтверждающих методов. Метод ТСХ обычно используется при анализе смывов с пальцев рук, ладоней, губ, полости рта,, т.е. в местах, где конденсируются продукты курения. Смывы производят с помощью ватного или марлевого тампона, смоченного этиловым спиртом.

Из материала тампона каннабиноиды экстрагируют органиче­ским растворителем — этилацетатом, гексаном, петролейным эфи­ром. Экстракт упаривают до конечного объема 0,1—0,3 мл и используют для предварительного обнаружения с помощью цветных реакций и методом ТСХ. Хроматографирование осуществляется в системе "петролейный эфир (40 — 70°С)—диэтиловый эфир (4:1)" двукратно. Обнаружение производят опрыскиванием хроматограм- мы 0,5%-ным раствором прочного синего Б или ББ в 10%-ном растворе карбоната натрия. Величина Rf каннабинола равна 0,76, тетрагидроканнабинола — 0,84.

Следует иметь в виду, что обнаружение каннабиноидов только в смывах не является подтверждением, что данное лицо курило гашиш.

Растение мак и опи й-с ы р е ц. Для исследований могут быть представлены куски растения и солома мака, измельченные головки мака и отвары (настои), полученные из них, опий, полученный из растения экстракционным путем. Основная цель исследования — установление наличия в представ­ленных образцах наркотических алкалоидов — морфина, кодеина, тебаина.

Если объектом исследования служат коробочки мака, их из­мельчают, удаляя предварительно семена. Далее их сушат при 60— 70°С в течение 5 часов и измельчают. Аналогичную подготовку (сушка и измельчение) осуществляют и с маковой соломой.

В случае опия-сырца и экстракционного опия образцы вначале замораживают, а затем быстро измельчают в фарфоровой ступке. Если образцы влажные, их предварительно высушивают при 60 — 70°С в течение 24 часов. Отвары (настои) можно непосредственно наносить на пластинку, предварительно профильтровав их. Для анализа растительного сырья образцы (100 мг) заливают 1 мл смеси этанола — хлороформа (1:2) или метанолом, содержащим 0,1% триэтиламина или 25% водного аммиака, и нагревают до начала кипения на кипящей водяной бане. Полученный экстракт фильт­руют и наносят на хроматографическую пластинку. Хроматогра­фирование — в системе этилацетат — этанол — 25%-ный аммиак (9:1:0,5), обнаружение— с помощью реактива Марки.

Конопля и гашиш. В качестве вещественных доказа­тельств могут фигурировать различные части растения конопли, ее метелки, мякина, гашиш и гашишное масло. Кроме того, при установлении факта употребления на исследование могут быть доставлены слюна, смывы с полости рта и с поверхности пальцев обследуемого.

При исследовании растительного сырья поступают следующим образом: от верхушечных частей конопли отделяют листья и со­цветия и перетирают их в фарфоровой чашке или через сито (диаметр ячейки не более 0,25 мм). 100 мг полученной массы за­ливают одним миллилитром этанола и осторожно нагревают на кипящей водяной бане (до начала кипения спирта). Полученный экстракт отделяют от осадка и наносят на ТСХ-пластинку для исследования.

После двукратного разделения в системе петролейный эфир — диэтиловый эфир (9:1) пластин          -20 минут при ком-

 

затем опрыскивают

 

натной температуре, изучают

раствором Прочного Синего Б (или ББ). Объект относится к гашишу либо сырью для его получения, если в нем выявлены А9-тетра­гидроканнабинол и (или) А8-тетрагидроканнабинол.

В настоящее время компьютеризованный метод газовой хроматографии с масс-спектральным детектированием (ГХ/МС-метод) как высокоспецифичный, чувствительный и доста­точно быстрый получил широкое применение для целей клиниче­ской, судебной и токсикологической химии. Преимущество его использования для идентификации неизвестных ядов, наркотиче­ских и лекарственных веществ и их метаболитов признано повсе­местно. По сравнению с прочими методами надежность идентифи­кации существенно повышается из-за использования специфической характеристики вещества, каковой является масс-спектр, в допол­нение к параметрам удерживания, получаемым в хроматографи- ческом процессе.

Поскольку масс-спектр отражает структуру молекулы, то его детальное изучение, основанное на известных закономерностях образования ионов, позволяет сделать логический вывод о строении и формуле анализируемого соединения. Идентификация значитель­но облегчается использованием компьютерного поиска на основе библиотек программного обеспечения, являющихся непременной частью современных ГХ/МС/ЭВМ-систем.

В области фармацевтического, токсикологического и судебного анализа, в том числе для определения наркотических и сильно­действующих веществ, используются в основном два типа ГХ/МС/ЭВМ-систем, имеющих отличия в конструкции масс-спек­трометра и в программном обеспечении. Первый, фирмы "Хью- летт — Паккард", использует "масс-селективный детектор" (МСД), второй, фирмы "Финниган", оснащен "ионной ловушкой".

Данный материал относится к ГХ/МС/ЭВМ-системе "Хьюлетт — Паккард": газовый хроматограф НР-5890, серия II, МСД НР-5971А, станция контроля и обработки данных НР-59970С.

 

Образцы мочи (не менее 50 мкл) отбирают в пластиковые или стеклянные контейнеры. Избегать резиновых пробок. Если ото­бранная проба не анализируется в течение одного дня, ее хранят в холодильнике не более трех дней (для каннабиноидов — 24 часа). Для более длительного хранения мочу необходимо заморозить. Перед анализом пробу оттаивают и доводят до комнатной темпе­ратуры. Использование консервантов для хранения мочи не реко­мендуется.

Протереть наконечник трубки дозатора обезжиренной тканью и опустить его во флакончик с калибратором так, чтобы он не касался стенок и дна флакона. Поднять плунжер дозатора полностью (до верха красной стрелки). Вынуть наконечник трубки из флакона с калибратором, снова его протереть и поместить его над калиб­ровочной виалой. Опустить плунжер, чтобы ввести калибратор и разбавитель в виалу. Немедленно приступить к следующей стадии.

Протереть наконечник трубки дозатора и опустить его в пробу мочи. Поднять плунжер дозатора полностью. Вынуть наконечник трубки дозатора из пробы, снова ее протереть и поместить над виалой для образца. Опустить плунжер, чтобы ввести образец мочи и разбавитель в виалу.

Закрыть виалы резиновыми пробками.

Вращать держатель виал круговыми движениями до растворения порошка (10— 15 с). Это время должно быть постоянным от об­разца к образцу

Поместить держатель виал в фотометр . Убедиться, что виала с калибратором находятся слева, а виала с образцом — справа. Нажмите обе виалы вниз, чтобы световая надпись "Insert Vials" погасла.

Поместить карту результатов с цветным блоком в верхнем правом углу в щель фотометра так, чтобы погасла световая надпись "Insert Card". Оставьте карту в этом положении до напечатания результатов (« 90 с).

Удалить карту результатов и виалы из фотометра после того, как надпись "Test in progress" погаснет.

Не оставляйте виалы в фотометре — это предохранит прибор от самокалибровки.

Подождите 15 секунд, прежде чем начинать следующее изме­рение.

2.3. Контроль качества работы прибора и диагностикума

Контроль качества работы прибора проводится ежедневно, со­гласно описанной выше процедуре, используя вместо образца мочи негативный и позитивный контроли, т.е. помещая флаконы с кон- тролями в фотометр вместо образца мочи. Если система функци­онирует нормально, то позитивный контроль будет давать поло­жительный результат, а негативный — отрицательный результат, причем полученные величины абсорбции должны укладываться в интервал, указанный на этикетке коробки с реакционными виалами.

 

3.1.                        Калибровка. В карусель для калибровки поместить 12 из­мерительных кювет и 12 катриджей. В катриджи внести не менее 60 мкл каждого из 6 стандартов (делается в дубле) с помощью автоматической пипетки. Поместить карусель и набор реагентов для анализа конкретного соединения или группы веществ в прибор ТДх-анализатор. Нажать клавишу "RUN". После выполнения ка­либровки прибор готов к анализу образцов мочи. Калибровка про­водится для каждого нового набора реагентов, но не реже одного раза в месяц.

Идентификация бензодиазепинов и бензофенонов, содержащихся в биопробах, производится следующим образом:

а)  сопоставляются время (объемы) удерживания и коэффици­енты емкости определяемого компонента и образцов сравнения (эталонный раствор) индивидуальных бензодиазепинов и бензофе­нонов;

б)  сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и об­разцы сравнения (на рис. 55 и 56 приведены УФ-спектры нитра- зепама, хлордиазепоксида, АНБ и АХБ в растворе подвижной фазы);

в)  оценивается совпадение значений времени удерживания оп­ределяемого компонента и образца сравнения при добавлении эта­лонного раствора в раствор экстракта из биопробы (концентрация образца сравнения должна быть близка к концентрации определя­емого компонента) (рис. 57);

г)  сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и об­разца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спект­ральное отношение.

На рис. 58, 59 приведены примеры хроматограмм экстрактов из мочи, желудка, кишечника, печени, почек, полученных на хро­матографах "Милихром" и "Милихром-2". В экспертном материале обнаружены диазепам, оксазепам, медазепам, МХБ.

Многие лекарственные соединения, которые не относятся к нар­котическим и одурманивающим веществам, имеют индексы удер­живания, близкие к индексам удерживания анализируемых ве­ществ, и могут влиять на результаты идентификации при их одновременном присутствии в моче (сравните табл.36 и 34). В моче легко обнаруживаются кофеин и его метаболиты.

Следует отметить, что индексы удерживания анализируемых веществ имеют тенденцию к зависимости от концентрации анали­зируемого вещества в растворе. Четко выраженную зависимость от концентрации имеют индексы удерживания нитразепама, кофеина, морфина, эфедрина, эфедрона, фенобарбитала, теофиллина, стрих­нина, хинина.

В связи с концентрационной зависимостью индексов удержива­ния каждое соединение имеет определенный диапазон значений индекса удерживания — "окошко поиска". Для большинства веществ "окошко поиска" составляет ± 20 единиц индекса от среднего значения индексов удерживания, представленных в табл. 34, 36.

"Окошки поиска" некоторых веществ перекрываются. Поэтому на этапе предварительного обнаружения в таких случаях следует ориентироваться на несколько веществ с перекрывающимися "окош­ками поиска".

Необходимо учитывать, что экстракт III получают без предва­рительной экстракции при кислом значении рН среды. Поэтому при рН=8,5 — 9,0 наряду с веществами основного характера экс­трагируются вещества кислотного (барбитураты, теофиллин), ней­трального (мепробамат) и слабоосновного характера (кофеин, ан­типирин, амидопирин).

Предлагаемую методику общего газохроматографического скри­нинга наркотических и одурманивающих веществ следует приме­нять для отсева отрицательных проб и предварительного обнару­жения в положительных образцах веществ различных фармаколо­гических групп. Все пробы-, давшие положительный результат, подтверждаются в дальнейшем с учетом предварительной иденти­фикации любым другим надежным методом.   t

3. Газохроматографическое обнаружение фенилалкиламинов в моче

Предлагаемая методика газохроматографического анализа по­зволяет проводить обнаружение метамфетамина, амфетамина, эфед­рона, эфедрина и норэфедрина в моче без их предварительной дериватизации с использованием пламенно-ионизационного детек­тора. Газохроматографическое разделение анализируемых веществ можно проводить как при программировании температуры колонки, так и в изотермическом режиме. Время анализа не превышает 12 минут. Мешающего влияния фона эндогенных веществ мочи не установлено.

Контрольная модельная смесь барбитала, фе­нобарбитала, циклобарбитала, барбамила и этаминала натрия го­товится в растворе подвижной фазы. Для этого:

а)  берутся навески барбитала (10 ± 0,5 мг), фенобарбитала (12 ± 0,5 мг), циклобарбитала (22 ± 0,5 мг), барбамила (21 ± 0,5 мг), этаминала натрия (35 ± 0,5 мг);

б)  навески переносятся в колбу 50 см , объем доводится до метки, смесь встряхивается до полного растворения и фильтруется. Смесь должна сохраняться при + 4°С в темноте.

Хроматографирование модельной смеси проводится при следу­ющих условиях: расход элюента—100мкл/мин; объем вводимой дозы — 4 мкл; масштаб регистрации — 0,4 е.о.п.; время измере­ния — 0,4 с; длина волны — 240 нм. Хроматограмма анализа мо­дельной смеси приведена на рис. 36, а основные хроматографические параметры — в табл. 45.

В соответствии с методикой изолирования эфед­рина и эфедрона из образца мочи [5] к 10 мл мочи добавляется 5% раствора гидроксида натрия до рН=11, 10 мл бензола и 5 мкл раствора амфетамина (используемого в качестве внутреннего стан­дарта) с концентрацией 10 мг/мл. После встряхивания в течение 3 минут и центрифугирования при 3000 об/мин в течение 5 минут бензольный слой упаривается досуха в токе холодного воздуха. Сухой остаток растворяется в 0,5 мл подвижной фазы, и 2 — 10 мкл вводится в хроматографическую колонку. На рис. 44 и 45 приведены хроматограммы экстрактов из пробы холостой мочи, не содержащей анализируемых веществ, и из мочи, содержащей эфедрин, эфедрон и амфетамин (внутренний стандарт) с концентрациями соответст­венно 50, 50 и 4 мкг/мл.